Насколько стабильна экстрагированная РНК при различных температурах? Руководство по безопасному хранению и обращению

В целом, правильно очищенная РНК значительно более стабильна, чем принято считать. Если она свободна от ферментативного загрязнения, экстрагированная РНК может храниться при комнатной температуре до двух дней, при 4°C до двух недель и выдерживает до десяти циклов замораживания-оттаивания при хранении при -20°C или -80°C без заметной деградации.

Основной принцип хранения РНК заключается не во врожденной хрупкости самой молекулы РНК, а в эффективной инактивации ферментов РНКаз. Температура — это просто инструмент, который мы используем для контроля активности этих разрушительных ферментов.

Истинная угроза целостности РНК: РНКазы

Общепринятое мнение о том, что РНК исключительно хрупка, является практической истиной, коренящейся в одной причине: рибонуклеазах (РНКазах). Понимание того, как их контролировать, является ключом к сохранению ваших образцов.

Что такое РНКазы?

РНКазы — это ферменты, которые специализируются на расщеплении РНК. Они отличаются исключительной стабильностью, не требуют кофакторов и присутствуют практически на любой поверхности, включая наши руки, частицы пыли и несертифицированное лабораторное оборудование.

Присутствие даже следовых количеств РНКазы в очищенном образце РНК является основной причиной деградации.

Как температура контролирует активность РНКаз

Хранение РНК при низких температурах не разрушает РНКазы; оно лишь замедляет их или переводит в спящее состояние.

• При комнатной температуре активные РНКазы быстро деградируют РНК.
• При 4°C ферментативная активность значительно снижается, но не прекращается.
• При -20°C и -80°C ферментативная активность фактически замораживается, сохраняя РНК неограниченно долго, пока она остается замороженной.

Именно поэтому сроки стабильности напрямую связаны с температурой — они являются мерой того, сколько времени требуется для того, чтобы любые потенциальные, загрязняющие РНКазы нанесли значительный ущерб.

Практическое руководство по хранению РНК

Стабильность вашей РНК полностью зависит от использования правильной температуры для запланированного срока, при условии, что вы соблюдали процедуры работы без нуклеаз во время экстракции.

Долгосрочное архивирование (-80°C)

Для хранения дольше нескольких месяцев или для особо ценных образцов -80°C является золотым стандартом. При этой температуре все ферментативные и почти все химические процессы останавливаются, обеспечивая целостность образца на годы.

Среднесрочное хранение (-20°C)

Для рутинной работы и хранения до нескольких месяцев -20°C вполне достаточно. Стабильность сравнима с -80°C для этого временного интервала, что делает его практичным выбором для большинства рабочих лабораторий.

Краткосрочное экспериментальное использование (4°C)

Вы можете уверенно хранить РНК на льду или в холодильнике при 4°C до 14 дней без деградации. Это идеально подходит, когда вы активно используете образец для серии экспериментов в течение одной-двух недель. Обязательно используйте герметичные пробирки для предотвращения испарения.

Немедленная работа на столе (комнатная температура)

Чистая РНК достаточно стабильна, чтобы находиться на чистом лабораторном столе при комнатной температуре до двух дней. Это обеспечивает безопасное окно для выполнения последующих приложений, таких как обратная транскрипция или подготовка планшета для qPCR, без необходимости постоянно держать образцы на льду.

Понимание компромиссов и лучших практик

Просто выбрать температуру недостаточно. Правильная стратегия обращения необходима для поддержания качества, установленного вашим протоколом экстракции.

Опасность циклов замораживания-оттаивания

Наибольший риск для замороженной РНК представляет не само хранение, а процесс оттаивания и повторного замораживания. Упоминание о 10 циклах замораживания-оттаивания является критическим пределом.

Каждый цикл представляет собой короткое окно, когда спящие РНКазы могут стать активными. Хотя один или два цикла вряд ли вызовут проблемы, повторные циклы неизбежно приведут к деградации образца.

Критическая важность аликвотирования

Лучшая практика для защиты вашей РНК — немедленно аликвотировать образец после экстракции.

Хранение основного образца в нескольких маленьких, одноразовых пробирках предотвращает необходимость оттаивания всего запаса для каждого эксперимента. Это полностью исключает повреждения, вызванные циклами замораживания-оттаивания, и сохраняет целостность вашего основного образца.

Хранение в воде или буфере

Хотя вода без нуклеаз является распространенным вариантом, хранение РНК в слабом буфере, таком как TE (Трис-ЭДТА), может обеспечить дополнительную защиту. ЭДТА в буфере хелатирует двухвалентные катионы, которые некоторым РНКазам необходимы для активности, добавляя еще один уровень защиты от остаточного загрязнения.

Правильный выбор для вашей цели

Ваша стратегия хранения должна определяться вашим экспериментальным планом и ценностью вашего образца.

• Если ваша основная цель — долгосрочное архивирование или создание бесценного эталонного образца: Храните РНК в буферном растворе, аликвотированную в одноразовые пробирки при -80°C.
• Если ваша основная цель — рутинный анализ в течение нескольких недель или месяцев: Хранение аликвот при -20°C обеспечивает практический баланс безопасности и доступности.
• Если ваша основная цель — немедленная обработка в течение нескольких дней: Хранение образца при 4°C или даже при комнатной температуре безопасно, при условии, что ваша первоначальная экстракция дала чистый продукт без нуклеаз.

В конечном итоге, ваша техника обращения и строгий рабочий процесс без нуклеаз гораздо важнее для сохранения вашей РНК, чем конкретная температура вашего морозильника.

Сводная таблица:

Температура	Максимальное рекомендуемое время хранения	Ключевое соображение
Комнатная температура	До 2 дней	Безопасно для немедленной работы на столе
4°C	До 2 недель	Идеально для краткосрочного экспериментального использования
-20°C	Несколько месяцев	Подходит для рутинной работы и среднесрочного хранения
-80°C	Годы (долгосрочное архивирование)	Золотой стандарт для ценных образцов

Обеспечьте целостность РНК в вашей лаборатории с помощью надежного оборудования от KINTEK. Правильное хранение — это лишь одна часть успешной работы с РНК. KINTEK специализируется на высококачественном лабораторном оборудовании и расходных материалах, включая морозильники, пробирки без нуклеаз и аксессуары, для поддержки ваших рабочих процессов в молекулярной биологии. Защитите свои ценные образцы и улучшите свои результаты. Свяжитесь с нашими экспертами сегодня, чтобы найти идеальные решения для нужд вашей лаборатории.

Визуальное руководство